驗(yàn)證內(nèi)容：準(zhǔn)確度、精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專(zhuān)屬性、檢測(cè)限、定量限、線(xiàn)性、范圍和耐用性。

　　一、準(zhǔn)確度： 是指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般以百分回收率表示。至少用9次測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。

　　二、精密度： 是指在規(guī)定的條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)過(guò)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。

　　1、 重復(fù)性：相同條件下，一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度稱(chēng)為重復(fù)性。至少9次。

　　2、 中間精密度： 一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度。

　　3、重現(xiàn)性：不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。分析方法被法定標(biāo)準(zhǔn)采用應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。

　　三、專(zhuān)屬性：指在其他成分可能存在的情況下，采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性，用于復(fù)雜樣品分析時(shí)相互干擾的程度。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定方法，圴應(yīng)考察專(zhuān)屬性。

　　四、檢測(cè)限：指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量，無(wú)須定量。用百分?jǐn)?shù)、ppm或ppb表示。

　　五、定量限：指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，測(cè)定結(jié)果應(yīng)具一定的精密度和準(zhǔn)確度。

　　六、線(xiàn)性：系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。

七、范圍：能達(dá)到一定的精密度、準(zhǔn)確度和線(xiàn)性的條件下，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。

八、耐用性：指在一定的測(cè)定條件稍有變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度。

方法驗(yàn)證內(nèi)容如下。

一、準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測(cè)試。

　　1．含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度

　　原料藥可用已知純度的對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一個(gè)方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。

制劑可用含已知量被測(cè)物的各組分混合物進(jìn)行測(cè)定。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定，或用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一個(gè)方法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較。

　　如該分析方法已經(jīng)測(cè)試并求出了精密度、線(xiàn)性和專(zhuān)屬性，在準(zhǔn)確度也可推算出來(lái)的情況下，這一項(xiàng)可不必再做。

　　2．雜質(zhì)定量測(cè)定的準(zhǔn)確度

　　可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。如不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測(cè)定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較，如藥典標(biāo)準(zhǔn)方法或經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的方法。在不能測(cè)得雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的響應(yīng)因子或?qū)υ纤幍南鄬?duì)響應(yīng)因子情況下，可用原料藥的響應(yīng)因子。應(yīng)明確表明單個(gè)雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比（%）或面積比（%）。

　　3．?dāng)?shù)據(jù)要求

　　在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，例如，設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定。應(yīng)報(bào)告已知加入量的回收率（%），或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或可信限。

　?。ㄒ庖?jiàn)3：是否對(duì)所設(shè)定的濃度范圍作出要求，如：該方法用于藥品的含量測(cè)定，回收率試驗(yàn)的樣品濃度應(yīng)設(shè)定于含量100％的±20％之間；用于溶出（釋放）曲線(xiàn)考察時(shí)，回收率試驗(yàn)的樣品濃度應(yīng)設(shè)定于全曲線(xiàn)范圍的上、中、下部位。）

二、精密度

　　精密度系指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。

　　在相同條件下，由一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度稱(chēng)為重復(fù)性；在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果之間的精密度，稱(chēng)為中間精密度；在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果之間的精密度，稱(chēng)為重現(xiàn)性。

　　含量測(cè)定和雜質(zhì)的定量測(cè)定應(yīng)考慮方法的精密度。

　　1．重復(fù)性

　　在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，例如，設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3份供試溶液，進(jìn)行測(cè)定?；?00%的濃度水平，用至少測(cè)定6次的結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。

　　2．中間精密度

　　為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響，應(yīng)設(shè)計(jì)方案進(jìn)行中間精密度試驗(yàn)。變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。

　　3．重現(xiàn)性

　　當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)，例如，建立藥典分析方法時(shí)通過(guò)協(xié)同檢驗(yàn)得出重現(xiàn)性結(jié)果。協(xié)同檢驗(yàn)的目的、過(guò)程和重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說(shuō)明中。應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗(yàn)用的樣品本身的質(zhì)量均勻性和貯存運(yùn)輸中的環(huán)境影響因素，以免影響重現(xiàn)性結(jié)果。

　　4．?dāng)?shù)據(jù)要求

　　均應(yīng)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和可信限。

三、專(zhuān)屬性

　　專(zhuān)屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測(cè)定出被測(cè)物的特性。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定方法均應(yīng)考察其專(zhuān)屬性。如方法不夠?qū)?，?yīng)采用多個(gè)方法予以補(bǔ)充。

　　1．鑒別反應(yīng)

　　應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分。不含被測(cè)成分的樣品，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物，應(yīng)均呈負(fù)反應(yīng)（不呈正反應(yīng)？）。

2．含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定

　　色譜法和其他分離方法，應(yīng)附代表性圖譜，以說(shuō)明方法的專(zhuān)屬性，并應(yīng)標(biāo)明諸成分在圖中的位置。色譜法中的分離度應(yīng)符合要求。

　　在雜質(zhì)可獲得的情況下，對(duì)于含量測(cè)定，試樣中可加入雜質(zhì)或輔料，考察測(cè)定結(jié)果是否受干擾，并可與未加雜質(zhì)或輔料的試樣比較測(cè)定結(jié)果。對(duì)于雜質(zhì)測(cè)定也可向試樣中加入一定量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)能否得到分離。

　　在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可將含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣進(jìn)行測(cè)定，與另一個(gè)經(jīng)驗(yàn)證了的或藥典方法比較結(jié)果。用強(qiáng)光照射，高溫，高濕，酸、堿水解或氧化的方法進(jìn)行加速破壞，以研究可能的降解產(chǎn)物和降解途徑。含量測(cè)定方法應(yīng)比對(duì)二法的結(jié)果，雜質(zhì)檢查應(yīng)比對(duì)檢出的雜質(zhì)個(gè)數(shù)，必要時(shí)可采用二極管陣列檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè)，進(jìn)行峰純度檢查。

四、檢測(cè)限

　　檢測(cè)限系指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。藥品的鑒別試驗(yàn)和雜質(zhì)檢查方法，均應(yīng)通過(guò)測(cè)試確定方法的檢測(cè)限。常用的方法如下。

　　1．非儀器分析目視法

用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。

　　2．信噪比法

　　用于能顯示基線(xiàn)噪聲的分析方法，即把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。一般以信噪比為3∶1或2∶1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。

　　3．?dāng)?shù)據(jù)要求

　　應(yīng)附測(cè)試圖譜，說(shuō)明測(cè)試過(guò)程和檢測(cè)限結(jié)果。

五、定量限

　　定量限系指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具一定準(zhǔn)確度和精密度。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物用定量測(cè)定方法研究時(shí)，應(yīng)確定方法的定量限。

　　常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10∶1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定定量限。

六、線(xiàn)性

　　線(xiàn)性系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。

　　應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測(cè)定線(xiàn)性關(guān)系。可用一貯備液經(jīng)精密稀釋?zhuān)蚍謩e精密稱(chēng)樣，制備一系列供試樣品的方法進(jìn)行測(cè)定，至少制備5份供試樣品。以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖，觀(guān)察是否呈線(xiàn)性，再用最小二乘法進(jìn)行線(xiàn)性回歸。必要時(shí)，響應(yīng)信號(hào)可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線(xiàn)性回歸計(jì)算。

　　數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線(xiàn)性圖。

（意見(jiàn)4：“線(xiàn)性”、“范圍”中，如測(cè)定方法用于溶出（釋放）曲線(xiàn)考察時(shí)，是否規(guī)定樣品濃度的范圍應(yīng)涵蓋整條曲線(xiàn)。）

七、范圍

　　范圍系指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線(xiàn)性，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。

　　范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線(xiàn)性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確定。原料藥和制劑含量測(cè)定，范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的80%～120%；制劑含量均勻度檢查，范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的70%～130%，根據(jù)劑型特點(diǎn)，如氣霧劑、噴霧劑，范圍可適當(dāng)放寬；溶出度或釋放度中的溶出量測(cè)定，范圍應(yīng)為限度的±20%，如規(guī)定了限度范圍，則應(yīng)為下限的-20%至上限的＋20%；雜質(zhì)測(cè)定，研究時(shí)，范圍應(yīng)根據(jù)初步實(shí)測(cè)，擬訂為規(guī)定限度的±20%。如果含量測(cè)定與雜質(zhì)檢查同時(shí)進(jìn)行，用百分歸一化法，則線(xiàn)性范圍應(yīng)為雜質(zhì)規(guī)定限度的-20%至含量限度（或上限）的＋20%。

八、耐用性

　　耐用性系指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度，為把方法用于常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。開(kāi)始研究分析方法時(shí)就應(yīng)考慮其耐用性。如果測(cè)試條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫(xiě)明。典型的變動(dòng)因素有：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性，樣品的提取次數(shù)、時(shí)間等。液相色譜法中典型的變動(dòng)因素有：流動(dòng)相的組成和pH值，不同廠(chǎng)牌或不同批號(hào)的同類(lèi)型色譜柱，柱溫，流速等。氣相色譜法變動(dòng)因素有：不同廠(chǎng)牌或批號(hào)的色譜柱、固定相，不同類(lèi)型的擔(dān)體，柱溫，進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度等。

　　經(jīng)試驗(yàn)，應(yīng)說(shuō)明小的變動(dòng)能否通過(guò)設(shè)計(jì)的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，以確保方法有效。

附表   檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容

      項(xiàng)目        鑒別        雜質(zhì)測(cè)定        含量測(cè)定及溶出量測(cè)定

      內(nèi)容                定量        限度

      準(zhǔn)確度        －        ＋        －        ＋

      精密度        －        －        －        ＋

      重復(fù)性        －        ＋        －        ＋

      中間精密度－        ＋①        －        ＋①

      專(zhuān)屬性②        ＋        ＋        ＋        ＋

      檢測(cè)限        －        －③        ＋        －

      定量限        －        ＋        －        －

      線(xiàn)性        －        ＋        －        ＋

      范圍        －        ＋        －        ＋

      耐用性        ＋        ＋        ＋        ＋

      ① 已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度。

      ② 如一種方法不夠?qū)伲捎闷渌治龇椒ㄓ枰匝a(bǔ)充。

      ③ 視具體情況予以驗(yàn)證。

床前明月光，疑是地上霜。

二、方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容

（一）準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測(cè)試。用于定量測(cè)定的分析方法均需做準(zhǔn)確度驗(yàn)證。

1.測(cè)定方法的準(zhǔn)確度

可用已知純度的對(duì)照品做加樣回收測(cè)定，即于已知被測(cè)成分含量的供試品中再精密加入一定量的已知純度的被測(cè)成分對(duì)照品，依法測(cè)定。用實(shí)測(cè)值與供試品中含被測(cè)成分量之差，除以加入對(duì)照品量計(jì)算回收率。

回收率%=

式中：A為供試品所含被測(cè)成分量；

B為加入對(duì)照品量；

C為實(shí)測(cè)值。

在加樣回收試驗(yàn)中，應(yīng)注意對(duì)照品的加入量與供試品中被測(cè)成分含有量之和必須在標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性范圍之內(nèi)；應(yīng)注意加入對(duì)照品的時(shí)間（供試品預(yù)處理前）；對(duì)照品的加入量要適當(dāng)，過(guò)小則引起較大的相對(duì)誤差，過(guò)大則干擾成分相對(duì)減少，真實(shí)性差。

2.數(shù)據(jù)要求

在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用6個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；或設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度分別制備3份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，一般中間濃度加入量與所取供試品含量之比控制在1:1左右。應(yīng)報(bào)告供試品取樣量、供試品中含有量、對(duì)照品加入量、測(cè)定結(jié)果和回收率(％)計(jì)算值，以及回收率(％)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD％）或可信限。

（二） 精密度

精密度系指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻供試品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。

用于定量測(cè)定的分析方法均應(yīng)考察方法的精密度。精密度包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性。

1.重復(fù)性

在相同操作條件下，由一個(gè)分析人員在較短的間隔時(shí)間內(nèi)測(cè)定所得結(jié)果的精密度稱(chēng)為重復(fù)性。

在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用6個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)；或設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。

2.中間精密度

在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果之間的精密度，稱(chēng)為中間精密度。

為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響，應(yīng)進(jìn)行中間精密度試驗(yàn)。變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備等。

3.重現(xiàn)性

在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果之間的精密度，稱(chēng)為重現(xiàn)性。

當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。例如，建立獸藥典分析方法時(shí)應(yīng)通過(guò)不同實(shí)驗(yàn)室的復(fù)核檢驗(yàn)得出重現(xiàn)性結(jié)果，復(fù)核檢驗(yàn)的目的、過(guò)程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說(shuō)明中。應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗(yàn)用的樣品本身的質(zhì)量均勻性和貯存運(yùn)輸中的環(huán)境影響因素，以免影響重現(xiàn)性結(jié)果。

4.數(shù)據(jù)要求

均應(yīng)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或可信限。

（三）專(zhuān)屬性

1.意義與要求

專(zhuān)屬性系指在其他成分可能存在下，采用的方法能正確測(cè)定出藥材、飲片、藥材提取物或制劑中被測(cè)成分的特性。鑒別、限量檢查、含量測(cè)定等方法均應(yīng)考察其專(zhuān)屬性。如方法不夠?qū)?，?yīng)采用其他方法予以補(bǔ)充。

2.鑒別試驗(yàn)

鑒別應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分。不含被測(cè)成分的供試品，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物，均不得干擾測(cè)定。顯微鑒別、色譜及光譜鑒別等應(yīng)附相應(yīng)的代表性圖像或圖譜。

3.含量測(cè)定和限量檢查

以不含被測(cè)成分的供試品(除去含待測(cè)成分藥材或不含待測(cè)成分的模擬復(fù)方)試驗(yàn)說(shuō)明方法的專(zhuān)屬性。色譜法和其他分析方法，應(yīng)附代表性圖譜，并標(biāo)明主成分在圖中的位置，以空白對(duì)照（除去含待測(cè)成分藥材或不含待測(cè)成分的模擬復(fù)方）試驗(yàn)說(shuō)明方法的專(zhuān)屬性。色譜法中的分離度應(yīng)符合要求，必要時(shí)可采用二極管陣列檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè)，對(duì)色譜峰進(jìn)行定性檢查。

（四）檢測(cè)限

檢測(cè)限系指供試品中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。確定檢測(cè)限常用的方法如下。

1.直觀(guān)法

用一系列已知濃度的供試品進(jìn)行分析，試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。

可用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。

2.信噪比法

僅適用于能顯示基線(xiàn)噪音的分析方法，即把已知低濃度供試品測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。一般以信噪比為3∶1或2∶1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。